E6-anti-ABP1转化烟草WS38的研究

E6-anti-ABP1转化烟草WS38的研究(毕业论文10600字)
摘  要：ABP1(auxin binding proteion)是植物中与生长素结合的蛋白，在植物细胞的伸长调控中发挥重要作用。本选题利用模式植物拟南芥ABP1cDNA序列，合成特异引物通过RT-PCR克隆了拟南芥ABP1cDNA(AtABP1,cDNA)并构建由棉纤维细胞特异表达启动子E6控制的反义表达载体，将其转入烟草WS38中,以农杆菌和叶盘共培养获得了抗性愈伤组织。
关键词：生长素结合蛋白;烟草WS38转化
           
Research on E6-anti-ABP1 Transformed into Nicotiana tabacum WS38
Abstract: ABP1 is an auxin binding proteion plant, it's funetional in cell elongation and growth regulation. In this paper special primers are designed according to arabidopsis thaliana ABP1cDNA sequence.The AtABP1 cDNA was amplied and cloned by RT-PCR.The cotton fiber specific express promoter controlled antisense At-ABP1,vector is constructed.The recombinant gene is then transformed into tobacco WS38 via Agrobacterium mediateal leaf-disc medium.Some antibiotic resisitance callus obtained.
Key words:Auxin binding protein, Tobacco WS38 transformation

目    录
摘  要    1
关键词    1
1 前言    1
1.1 ABP1在植物体内的分布    2
1.2 ABP1的结构和性质    2
1.3 前景展望    3
2 材料与试剂    4
2.1 酶与试剂设备    4
2.2 植物材料及培养基    4
2.2.1 材料    4
2.2.2 培养基    5
2.3 技术路线    6
3 试验方法    6
3.1 总RNA提取    6
3.1.1 实验步骤    7
3.2 cDNA中间区段的克隆    7
3.3 目的基因的扩增    8
3.3.1 RT-PCR扩增    8
3.3.2 PCR产物的回收    9
3.4 用EcoRI和XbaI进行双酶切    10
3.5 目的片段与载体的连接及转化    10
3.5.1 将酶切后目的片段进行连接    10
3.5.2 重组载体的转化    10
3.5.3 PBI121载体菌落PCR及质粒双酶切检测    11
3.6 表达载体E6-ABP1转化根癌农杆菌    13
3.6.1 农杆菌感受态细胞的制备和转化    13
3.7 叶盘法转化烟草    14
3.7.1 农杆菌的培养    14
3.7.2 共培养    14
3.7.3 诱导丛生芽    14
4 结果与分析    15
4.1 AtABP1目的基因PCR扩增结果    15
4.2 菌落PCR    15
4.3 E6-anti-ABP1载体双酶切检测    16
4.4 农杆菌抗性检测    16
4.5 诱导愈伤组织情况    17
5 讨论    18
5.1 提取RNA及RT-PCR的注意事项    18
5.2 PCR产物电泳检测注意事项    18
5.3 双酶切的注意事项    19
5.4 烟草转化的注意事项    19
6 结论    19
参考文献    20
致    谢    22