拟南芥ABP1基因cDNA克隆与E6特异启动子的重组构建

拟南芥ABP1基因cDNA克隆与E6特异启动子的重组构建(毕业论文10200字)
    摘  要：根据GenBank中收录的拟南芥ABP1基因mRNA序列设计引物，采用RT-PCR的方法，克隆了该基因cDNA，并将其重组到棉花纤维细胞特异表达启动子E6下游，构建成可在纤维细胞特异表达ABP1的重组子，经PCR和酶切检查，证实重组子构建正确。为将ABP1转入棉花纤维细胞或模式植物的表皮毛（trichome）中表达，完成了基因的重组构建。
    关键词：拟南芥；ABP1 cDNA；E6特异启动子；重组构建

Cloning of arabidopsis ABP1 cDNA and recombinate into E6 specific promoter
    Abstract: Primers are synthesized according to the sequence of Arabidopsis ABP1 mRNA in Genbank. Its cDNA obtained and cloned by RT-PCR and A-T cloning method. The molecule is then combined into the downstream of a cotton fiber cell specific promoter E6. It was identified by PCR and enzyme digestion. The specific promoter enables the ABP1 specifically express in fiber cells or trichome. This work set a foundation for study of the ABP1 function in cell elongation research.
    Key words: Arabidopsis; ABP1 cDNA; E6 specific promoter; Recombination

目    录
摘  要    1
关键词    1
1  前言    1
2  材料与方法    3
2.1  实验材料    3
2.1.1  植物材料    3
2.1.2  质粒和菌种    3
2.2  试剂和仪器    3
2.2.1  试剂与配制     3
2.2.2  酶与试剂盒    4
2.2.3  仪器与设备    4
2.3  实验步骤    5
2.3.1  拟南芥mRNA的分离    5
2.3.2  RT-PCR扩增    5
2.3.3  PCR产物的回收    6
2.3.4  与E6启动子的重组构建    7
2.3.5  表达载体pBI121-E6-ABP1转化根癌农杆菌    9
3  结果与分析    10
3.1  AtABP1目的基因PCR扩增结果    10
3.2  大肠杆菌菌落PCR电泳图    11
3.3  双酶切检测电泳图    11
3.4  农杆菌菌落PCR电泳图    11
4  讨论    12
4.1  Trizol法提取RNA常见问题分析    12
4.1.1  预防RNase污染注意事项：    12
4.1.2  得率低    12
4.1.3  RNA降解    13
4.1.4  DNA污染    13
4.1.5  蛋白聚糖和多糖污染    13
4.2  RT-RCR过程中常见问题    13
4.2.1  在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物    13
4.2.2  污染造成假阳性    14
4.2.3  在无反转录酶的情况下，对照RNA获得扩增结果    15
4.2.4  扩增产物滞留在加样孔中    15
4.3  酶切及凝胶电泳时应注意的问题    15
5  结论    16
参考文献    16
致    谢    16