酸性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化

来源：56doc.com 资料编号：5D12123 资料等级：★★★★★ %E8%B5%84%E6%96%99%E7%BC%96%E5%8F%B7%EF%BC%9A5D12123

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资料介绍

酸性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化(毕业论文10000字)
摘要：以酪素为唯一氮源，从浏阳河畔土样筛选出一株酸性蛋白酶产生菌Lin-10，该菌经革兰氏染色鉴定为革兰氏阴性菌，通过单一因子实验对该菌株进行发酵条件的优化，得出最适碳源为2%玉米粉、最适氮源为0.6%硫酸铵，在初始pH 6.0、发酵温度32 ℃的条件下发酵培养2 d，酶活能达778.53 IU/ml，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步测得该酶的分子量为28kDa。
关键词：酸性蛋白酶；革兰氏阴性菌；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；

Screening A Strain Of acid Protease And Optimizing Fermentation Conditions

Abstract：A acid protease producing strain Lin-10 was screened by casein medium(casein as unique nitrogen source) from soil near Liu Yang River. Lin-10 was identified as gram-negative bacterium. Fermentation conditions for secreting protease were optimized by single factor experiment. The results showed the protease activity reached 778.53 IU/mL when Lin-10 was cultured under conditions：carbon source 2% corn flour, nitrogen source 0.6% ammonium sulfate, initial pH of medium 6.0, culture temperature 32℃, fermentation period 2 days. The molecular weight of protease from strain Lin-10 was 28 kDa estimated by method SDS-PAGE.

Key words：acid protease; gram-negative bacterium; SDS - polyacrylamide gel electrophoresis;

摘要……………………………………………………………………………1

关键词…………………………………………………………………………1

1 前言……………………………………………………………………………1

1.1 酸性蛋白酶国内外研究进展…………………………………………………2

1.2 酸性蛋白酶的生产及条件优化………………………………………………2

1.3 酸性蛋白酶的应用前景…………………………………………………………3

2实验材料与方法………………………………………………………………………3

2.1实验材料………………………………………………………………………3

2.2主要药品与试剂………………………………………………………………3

2.2.1 药品………………………………………………………………………3

2.2.2 试剂………………………………………………………………………4

2.3主要仪器………………………………………………………………………4

2.4酸性蛋白酶产生菌的筛选……………………………………………………5

2.3.1 采集样品及土壤样品的富集培养…………………………………5

2.3.2 初筛…………………………………………………………………5

2.3.3 复筛………………………………………………………………………6

2.3.4 菌种的鉴定………………………………………………………………6

2.4 酸性蛋白酶产生菌发酵条件的优化…………………………………………6

2.4.1 酶活力定义………………………………………………………………6

2.4.2 标准曲线的制作…………………………………………………………6

2.4.3 酸性蛋白酶酶活力的测定 ………………………………………………7

2.4.3 单因子实验………………………………………………………………7

2.5 SDS-PAGE法测定酸性蛋白酶相对分子质量………………………………8

2.5.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 …………………………………………8

2.5.2 凝胶的制备 ………………………………………………………………8

2.5.3 电极缓冲液的选择 ………………………………………………………9

2.5.4 电泳 ………………………………………………………………………9

2.5.5 染色于固定 ………………………………………………………………9

2.5.6 脱色 ………………………………………………………………………9

3 结果与分析………………………………………………………………………9

3.1 酸性蛋白酶产生菌的筛选 ……………………………………………………9

3.1.1 初筛 ………………………………………………………………………9

3.1.2 形态学研究………………………………………………………………10

3.2 单一因子实验研究……………………………………………………………10

3.2.1 酸性蛋白酶产生菌发酵周期的测定……………………………………10

3.2.2 最适氮源、碳源的筛选 …………………………………………………11

3.2.3 温度对酸性蛋白酶产生菌发酵的影响…………………………………12

3.2.4 初始PH对酸性蛋白酶产生菌发酵的影响………………………………13

3.3 SDS-PAGE电泳研究……………………………………………………13

4实验结论……………………………………………………………………………14

参考文献 ………………………………………………………………………14

致谢……………………………………………………………………………14